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Ç€JÙ6UW�SgËœÓµi¨KsC‹¡kšnsêfÙÊÜædäÄ\£Æœ´YkÔl3§�«\k‰�ª¶Ijh.Ó�i³¹ESPkb¸1S\I’âj ÅF5öÝ4žG  ?<AlignableSequences trimStringency="Medium"><Sequence name="pDIRECT_23C" ID="0" use="0" sortOrder="0" trimmedRange="0..15743"/><Sequence name="G6947 pDIRECT23C-CmYLCV-Csy4-FPA-sgRNA1-sgRNA2" ID="1" use="0" sortOrder="1" trimmedRange="0..15238"/><Sequence name="G6948-A" ID="2" use="0" sortOrder="2" trimmedRange="0..15238"/><Sequence name="74_M13F_TSS20211110-027-04068_E11" ID="3" isTrace="1" use="0" sortOrder="3" trimmedRange="7..1099"/><Sequence name="74_M13F_TSS20211110-027-04068_E11" ID="4" use="0" sortOrder="4" trimmedRange="0..1100"/><Sequence name="75_M13F_TSS20211110-027-04068_F11" ID="5" isTrace="1" use="0" sortOrder="5" trimmedRange="7..1095"/><Sequence name="75_M13F_TSS20211110-027-04068_F11" ID="6" use="0" sortOrder="6" trimmedRange="0..1095"/><Sequence name="76_M13F_TSS20211110-027-04068_G11" ID="7" isTrace="1" use="0" sortOrder="7" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1094"/><Sequence name="76_M13F_TSS20211110-027-04068_G11" ID="8" use="0" sortOrder="8" trimmedRange="0..1094"/><Sequence name="77_M13F_TSS20211110-027-04068_H11" ID="9" isTrace="1" use="0" sortOrder="9" trimmedRange="6..995"/><Sequence name="77_M13F_TSS20211110-027-04068_H11" ID="10" use="0" sortOrder="10" trimmedRange="0..999"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="11" isTrace="1" use="0" sortOrder="11" trimmedRange="13..1094"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="12" isTrace="1" use="0" sortOrder="12" trimmedRange="7..1115"/><Sequence name="83_G6948-F1_TSS20211119-027-07862-02_C01" ID="13" isTrace="1" use="0" sortOrder="13" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1109"/><Sequence name="83_G6948-F1_TSS20211119-027-07862-02_C01" ID="14" use="0" sortOrder="14" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1109"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="15" isTrace="1" use="0" sortOrder="15" trimmedRange="13..1094"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="16" use="0" sortOrder="16" trimmedRange="0..1103"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="17" isTrace="1" use="0" sortOrder="17" trimmedRange="7..1115"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="18" use="0" sortOrder="18" trimmedRange="0..1115"/><Sequence name="G6948-B  (BsmBI (9391) .. MluI (9369))" ID="19" use="0" sortOrder="19" trimmedRange="0..14570"/><Sequence name="114_M13F_TSS20211202-027-00644_A05" ID="20" isTrace="1" use="0" sortOrder="20" trimmedRange="7..731"/><Sequence name="114_M13F_TSS20211202-027-00644_A05" ID="21" use="0" sortOrder="21" trimmedRange="0..852"/><Sequence name="115_M13F_TSS20211202-027-00644_B05" ID="22" isTrace="1" use="0" sortOrder="22" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1105"/><Sequence name="115_M13F_TSS20211202-027-00644_B05" ID="23" use="0" sortOrder="23" trimmedRange="0..1105"/><Sequence name="142_G6948-F1_TSS20211214-027-05786_D03" ID="24" isTrace="1" use="0" sortOrder="24" trimmedRange="15..1128"/><Sequence name="142_G6948-F1_TSS20211214-027-05786_D03" ID="25" use="0" sortOrder="25" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1128"/><Sequence name="142_M13F_TSS20211214-027-05786_B07" ID="26" isTrace="1" use="0" sortOrder="26" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1049"/><Sequence name="142_M13F_TSS20211214-027-05786_B07" ID="27" use="0" sortOrder="27" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1049"/><Sequence name="143_M13F_TSS20211214-027-05786_C07" ID="28" isTrace="1" use="0" sortOrder="28" trimmedRange="11..1035"/><Sequence name="143_M13F_TSS20211214-027-05786_C07" ID="29" use="0" sortOrder="29" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1044"/><Sequence name="144_M13F_TSS20211214-027-05786_D07" ID="30" use="0" sortOrder="30" trimmedRange="0..458"/><Sequence name="144_M13F_TSS20211214-027-05786_D07" ID="31" isTrace="1" use="0" sortOrder="31" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..458"/><Sequence name="124_G6948-F1_TSS20211222-027-09199_C02" ID="32" isTrace="1" use="0" sortOrder="32" trimmedRange="11..1034"/><Sequence name="124_M13F_TSS20211222-027-09199_A02" ID="33" isTrace="1" use="0" sortOrder="33" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..1054"/><Sequence name="G1224-G6948_M13F_TSS20211231-027-13544_C04" ID="34" isTrace="1" use="0" sortOrder="34" trimmedRange="22..879"/><Sequence name="G1225-G6948_M13F_TSS20211231-027-13544_D04" ID="35" isTrace="1" sortOrder="35" trimmedRange="24..1142"/><Sequence name="G6947-BSAIä½�ç‚¹" ID="36" sortOrder="36" manuallyTrimmed="1" trimmedRange="0..15238"/></AlignableSequences>  !<AdditionalSequenceProperties><UpstreamStickiness>0</UpstreamStickiness><DownstreamStickiness>0</DownstreamStickiness><UpstreamModification>FivePrimePhosphorylated</UpstreamModification><DownstreamModification>FivePrimePhosphorylated</DownstreamModification></AdditionalSequenceProperties>
  ;L<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="31"><Feature recentID="30" name="å�Œæº�è‡‚" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10050-10100" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="29" name="Feature 30" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9933-9973" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="28" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="27" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12860-13933" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="26" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="25" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="24" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11802-12431" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14863-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="13999-14193" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10065-10239" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14537-14677" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10477-10501" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10258-10274" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="3" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10031-10045" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9950-10025" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="0" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9930-9949" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature></Features>
  ›<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="7"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/><Primer recentID="0" name="-1a-F" sequence="TAACGCCATCGAAAGTACACGTTTTAGAGCTAGAAATAGC" description="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;" dateAdded="2021-12-23T07:34:00Z"><BindingSite location="9832-9852" boundStrand="0" annealedBases="CGTTTTAGAGCTAGAAATAGC" meltingTemperature="53"><Component bases="TAACGCCATCGAAAGTACA"/><Component hybridizedRange="9832-9852" bases="CGTTTTAGAGCTAGAAATAGC"/></BindingSite><BindingSite location="9929-9968" boundStrand="0" annealedBases="TAACGCCATCGAAAGTACACGTTTTAGAGCTAGAAATAGC" meltingTemperature="65"><Component hybridizedRange="9929-9968" bases="TAACGCCATCGAAAGTACACGTTTTAGAGCTAGAAATAGC"/></BindingSite><BindingSite simplified="1" location="9832-9852" boundStrand="0" annealedBases="CGTTTTAGAGCTAGAAATAGC" meltingTemperature="53"><Component bases="TAACGCCATCGAAAGTACA"/><Component 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  ?<Notes>
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<Type>Synthetic</Type>
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<LastModified UTC="6:31:3">2022.1.4</LastModified>
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  e<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors> \{     ô  ;‡         ;‡$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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‚b«PÃZm36§C[¹á\›³­•ƒÚ"¨€hä„æÚ ÀÍY0qLV@Mæ6#T˜±Mg”ƒŠ!µAPÌÉdBNNœ›�3kD±œ¹¹\-r ŒÜrNe¶�ÛÜ†ÎÜœ8Œ -¨˜S‚I�à¶ÙI"$·b“IÌ¹hs ZLg.–€ÎÔÚšËAH$b�ŽIR�L¦Ì¹‰º¡ ³–Óår›Ðp3† ÌCt‚–3–C�L™4ÇÄÎa„£˜1çDrÖj±	•‹é ¢ ¶…3b,ˆ±€±­ÖšÀ È­µÜ m­mÛæVnm­�ÛZ¹ms06`ÁÄD6¬mŽÁ”­kÛÚŠ97—$càp�µ«±Â±‚±Ø€9­……e¦AäJB†k*bs €Ï—äa  å<AlignableSequences><Sequence name="pDIRECT_23C" ID="0" use="0" sortOrder="0"/><Sequence name="G6947 pDIRECT23C-CmYLCV-Csy4-FPA-sgRNA1-sgRNA2" ID="1" use="0" sortOrder="1"/><Sequence name="G6948-A" ID="2" use="0" sortOrder="2"/><Sequence name="74_M13F_TSS20211110-027-04068_E11" ID="3" isTrace="1" use="0" sortOrder="3"/><Sequence name="74_M13F_TSS20211110-027-04068_E11" ID="4" use="0" sortOrder="4"/><Sequence name="75_M13F_TSS20211110-027-04068_F11" ID="5" isTrace="1" use="0" sortOrder="5"/><Sequence name="75_M13F_TSS20211110-027-04068_F11" ID="6" use="0" sortOrder="6"/><Sequence name="76_M13F_TSS20211110-027-04068_G11" ID="7" isTrace="1" use="0" sortOrder="7"/><Sequence name="76_M13F_TSS20211110-027-04068_G11" ID="8" use="0" sortOrder="8"/><Sequence name="77_M13F_TSS20211110-027-04068_H11" ID="9" isTrace="1" use="0" sortOrder="9"/><Sequence name="77_M13F_TSS20211110-027-04068_H11" ID="10" use="0" sortOrder="10"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="11" isTrace="1" use="0" sortOrder="11"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="12" isTrace="1" use="0" sortOrder="12"/><Sequence name="83_G6948-F1_TSS20211119-027-07862-02_C01" ID="13" isTrace="1" use="0" sortOrder="13"/><Sequence name="83_G6948-F1_TSS20211119-027-07862-02_C01" ID="14" use="0" sortOrder="14"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="15" isTrace="1" use="0" sortOrder="15"/><Sequence name="83_M13F_TSS20211119-027-07862_G08" ID="16" use="0" sortOrder="16"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="17" isTrace="1" use="0" sortOrder="17"/><Sequence name="84_M13F_TSS20211119-027-07862_H08" ID="18" use="0" sortOrder="18"/><Sequence name="G6948-B  (BsmBI (9391) .. MluI (9369))" ID="19" sortOrder="19"/></AlignableSequences>  !<AdditionalSequenceProperties><UpstreamStickiness>0</UpstreamStickiness><DownstreamStickiness>0</DownstreamStickiness><UpstreamModification>FivePrimePhosphorylated</UpstreamModification><DownstreamModification>FivePrimePhosphorylated</DownstreamModification></AdditionalSequenceProperties>
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plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="26" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="25" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="24" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11794-12423" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14855-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="13991-14185" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10057-10231" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14529-14669" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9826-9901" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10469-10493" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10250-10266" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9791-9805" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9907-9921" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9314-9778" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="3" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10023-10037" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9942-10017" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9806-9825" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="0" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9922-9941" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature></Features>
  Á<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="1"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/><Primer recentID="0" name="Primer 1" sequence="TGTGGTTGGCATGCACATAC" description="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"><BindingSite location="10568-10587" boundStrand="1" annealedBases="TGTGGTTGGCATGCACATAC" meltingTemperature="57"><Component hybridizedRange="10568-10587" bases="TGTGGTTGGCATGCACATAC"/></BindingSite><BindingSite simplified="1" location="10568-10587" boundStrand="1" annealedBases="TGTGGTTGGCATGCACATAC" meltingTemperature="57"><Component hybridizedRange="10568-10587" bases="TGTGGTTGGCATGCACATAC"/></BindingSite></Primer></Primers>
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  9Ë<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="29"><Feature recentID="28" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9922-9941" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="27" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9806-9825" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="26" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9942-10017" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="25" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10023-10037" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="24" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9314-9778" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9907-9921" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9791-9805" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10278-10294" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10497-10521" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9826-9901" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14557-14697" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10085-10259" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14019-14213" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14883-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11822-12451" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12880-13953" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  @<Notes>
<UUID>10fee2fd-296b-4619-902f-00a6615c4714</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="3:0:32">2021.9.17</LastModified>
<SequenceClass>UNA</SequenceClass>
<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
  e<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9805..9824" colors="red"/><ColorRange range="9825..9920" colors="black"/><ColorRange range="9921..10036" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9805..9824" colors="red"/><ColorRange range="9825..9920" colors="black"/><ColorRange range="9921..10036" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors>  pQ     ý  ;«         ;«$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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  9Ë<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="29"><Feature recentID="28" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9930-9949" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="27" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="26" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9950-10025" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="25" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10031-10045" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="24" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10286-10302" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10505-10529" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14565-14705" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10093-10267" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14027-14221" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14891-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11830-12459" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12888-13961" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  A<Notes>
<UUID>10fee2fd-296b-4619-902f-00a6615c4714</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="2:59:57">2021.9.17</LastModified>
<SequenceClass>UNA</SequenceClass>
<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
  e<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors>  Mn     ý  ;«         ;«$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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  9ò<?xml version="1.0"?><Features recycledIDs="8" nextValidID="30"><Feature recentID="26" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="29" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9950-10025" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="28" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10031-10045" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="27" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9930-9949" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="25" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="24" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9929" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10286-10302" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10505-10529" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14565-14705" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10093-10267" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14027-14221" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14891-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11830-12459" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12888-13961" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  @<Notes>
<UUID>24d1d511-369c-4910-8d60-13410eb07037</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="3:2:20">2021.9.10</LastModified>
<SequenceClass>UNA</SequenceClass>
<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
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  e<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors>  Mƒ     ý  ;«         ;«$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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ùbpMäZ?“@P±T>êø�“rv€_Õ<� Á'hýSÉÚ|-Ý‰HxfUUC«Ï•{©W¦•{¥_Ïƒâ6^.LÝ?Q8ÕS>¬,ã;ùÏóÎ³,>lÃÎ;U`àùÃÐÖçÐ3SÌòÏ{<3÷mC�³2¬!‡Uû‡v4ïÁ\-Ó¢âS<ÑÔü´ËL À‹ Í=‡ô·$ÆL&x:^c´M'„Hßf0ˆV|ÝÉAgÍ´?ºó¯³·‡³Œì,¬8Ã	´ííPÂYÂ›ÝÐ\ÐT]ˆMT=5PôÉU2Žª½�ï?þM·Ulsµ-ƒüteF}«ÿ�NþÈÎïŠñþ<éðgâóêïëLƒ:»díÎ$&í+�²³½Nˆ�Åÿò´ü|ã>›Â^lºõü%Ç¦Ïx4ÓÞ	tM&  !<AdditionalSequenceProperties><UpstreamStickiness>0</UpstreamStickiness><DownstreamStickiness>0</DownstreamStickiness><UpstreamModification>FivePrimePhosphorylated</UpstreamModification><DownstreamModification>FivePrimePhosphorylated</DownstreamModification></AdditionalSequenceProperties>
  :<?xml version="1.0"?><Features recycledIDs="8" nextValidID="30"><Feature recentID="29" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9950-10025" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="28" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10031-10045" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="27" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9930-9949" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="26" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="25" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="24" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9929" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9813" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10286-10302" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10505-10529" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14565-14705" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10093-10267" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14027-14221" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14891-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11830-12459" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12888-13961" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  ?<Notes>
<UUID>24d1d511-369c-4910-8d60-13410eb07037</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
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<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="3:2:1">2021.9.10</LastModified>
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  e<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9813..9832" colors="red"/><ColorRange range="9833..9928" colors="black"/><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors>  PU     ”  >         >$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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  <ù<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="30"><Feature recentID="29" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9950-10025" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="28" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10031-10045" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="27" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9930-9949" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="26" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="25" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="24" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9929" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9813" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10891-10907" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="11110-11134" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15170-15310" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10698-10872" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14632-14826" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="ccdB" directionality="1" translationMW="11706.79" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="10365-10670" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Plasmids containing the &lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt; gene cannot be propagated in standard &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; strains.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15496-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12435-13064" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="13493-14566" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  A<Notes>
<UUID>24d1d511-369c-4910-8d60-13410eb07037</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="2:52:27">2021.9.10</LastModified>
<SequenceClass>UNA</SequenceClass>
<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
   ­<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="9929..10044" colors="red"/></BottomStrand></StrandColors>  JÊ     w  =”         =”$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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+QÆç4ƒLðD­E+Š·ÈÍNÕ‡ãÁ'…À48?ä¶3Ÿ5øl@Å6óÂ¾XœF9V�äÐT,Uº¾ dÜ� õO'hð_ÉÚTòv€_wbR•DUPÆªóå^êUé¥^éWóàø�—‹ƒÓ7OÔN5TÏŸë8Îþsüó¬Ë›0óƒÎÕX8>pô5¹ôÁÔó<³ÞÇÏýÛPßãìÌ«aÂ~áÝ�;ðWtè¸”Á�4u?-2Ó(0"À3Oaý-É1“‰ž—˜ÃmF‰á7ÙŒ"Ÿ7F2PEYómî¼ëìíáìã;+0ÄÂm;{T0–p¦÷E´—4bUMT=òUCÌ£ƒ*¯d;Ïÿ‡mÕ[íKD Å™QŸC*ÿàS¿²3»â¼�:|ø¼ú»úÀS Î®Ù;s‰	»JÂ$,¬ïS€â#qü­?8Ï¦ð—›.„½	Gqé³Þ4÷‚]“DÄ&  !<AdditionalSequenceProperties><UpstreamStickiness>0</UpstreamStickiness><DownstreamStickiness>0</DownstreamStickiness><UpstreamModification>FivePrimePhosphorylated</UpstreamModification><DownstreamModification>FivePrimePhosphorylated</DownstreamModification></AdditionalSequenceProperties>
  8=<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="27"><Feature recentID="26" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9833" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="25" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="24" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9929" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9915-9929" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9813" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10775-10791" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10994-11018" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9834-9909" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15054-15194" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10582-10756" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14516-14710" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="ccdB" directionality="1" translationMW="11706.79" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="10249-10554" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Plasmids containing the &lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt; gene cannot be propagated in standard &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; strains.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15380-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12319-12948" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="13377-14450" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
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<UUID>24d1d511-369c-4910-8d60-13410eb07037</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="2:49:54">2021.9.10</LastModified>
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<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
  J	      r  =€         =€$0ŽtJèR>^pçy& ›Œî8SÒŸ¬Q($î†ðÕÕ÷Î	0‚ª¢£SMs4UTµo¨n«œáÎÒÅ^Ü¥ªck�žUÖ¶ô•fYªj»õ´:ý%-Udìvx®¿Æo¿†ÇÁÍ5‹gÞ‹ÏãÎ»õYSÞž£Û«uF(âïÐ³ÈQÔ¯ºÀê¼º•VÙÓ³0n¥`HºëôªÍovÃÑ²šÒR[Ö°å0âå9¬™Öñ˜±�!Q>ÞógNÆ[ªÐ:ŠÛ­žëÄÕ=°û{a4hïOm�+T�êÐÓ«ëÓÙ6Ø¾«ò½Ûd ¿©Ÿ/-ª•™
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  7�<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="26"><Feature recentID="25" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9322-9786" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="24" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9909" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9895-9909" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="9813" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9799-9813" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10755-10771" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10974-10998" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.23" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9814-9889" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15034-15174" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10562-10736" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14496-14690" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="ccdB" directionality="1" translationMW="11706.79" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="10229-10534" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Plasmids containing the &lt;i&gt;ccdB&lt;/i&gt; gene cannot be propagated in standard &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; strains.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20638.01" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="5" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="15360-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22059.04" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12299-12928" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="2" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.66" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="1" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39881.57" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="13357-14430" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="0" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158444.81" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  A<Notes>
<UUID>24d1d511-369c-4910-8d60-13410eb07037</UUID>
<Type>Synthetic</Type>
<ConfirmedExperimentally>0</ConfirmedExperimentally>
<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
<LastModified UTC="2:49:25">2021.9.10</LastModified>
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<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
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  EÁ<?xml version="1.0"?><Features nextValidID="31"><Feature recentID="0" name="sgRNA2" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9922-9941" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="1" name="sgRNA1" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9806-9825" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="2" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9942-10017" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="3" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10023-10037" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="4" name="CmYLCV promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9314-9778" color="#ffffff" type="standard"/></Feature><Feature recentID="5" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9907-9921" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="6" name="Csy4 site" directionality="1" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9791-9805" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/i&gt; Csy4 (Cas6f)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cleavage site for the Csy4 endoribonuclease (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20829488&quot;&gt;Haurwitz et al., 2010&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="7" name="M13 fwd" directionality="2" type="primer_bind" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10250-10266" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="8" name="M13 rev" directionality="1" type="primer_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3354-3370" color="#a020f0" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;common sequencing primer, one of multiple similar variants&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="9" name="lac operator" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3330-3346" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor encoded by &lt;i&gt;lacI&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;The &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; repressor binds to the &lt;i&gt;lac&lt;/i&gt; operator to inhibit transcription in &lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt;. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-Î²-D-thiogalactopyranoside (IPTG).&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="10" name="SV40 NLS" directionality="1" translationMW="883.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" consecutiveNumberingStartsFrom="126" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="9010-9030" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;nuclear localization signal of SV40 (simian virus 40) large T antigen&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="PKKKRKV"/></Q></Feature><Feature recentID="11" name="CAP binding site" type="protein_bind" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3256-3277" color="#31849b" type="standard"/><Q name="bound_moiety"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;E. coli&lt;/i&gt; catabolite activator protein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;CAP binding activates transcription in the presence of cAMP.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="12" name="RB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10469-10493" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;right border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="13" name="LB T-DNA repeat" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1510-1534" color="#ffe4c4" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;left border repeat from nopaline C58 T-DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="14" name="lac promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment name="-35" range="3292-3297" color="#ffffff" type="standard"/><Segment range="3298-3315" color="#ffffff" type="standard"/><Segment name="-10" range="3316-3322" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;promoter for the &lt;i&gt;E. coli lac&lt;/i&gt; operon&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="15" name="P2A" directionality="1" translationMW="1987.15" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" cleavageArrows="4890" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4837-4893" color="#cc99b2" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond between the Gly and Pro residues, yielding separate polypeptides.&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"/></Q></Feature><Feature recentID="16" name="gRNA scaffold" directionality="1" type="misc_RNA" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9826-9901" color="#00ccff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;guide RNA scaffold for the &lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt; CRISPR/Cas9 system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="17" name="bom" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14529-14669" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;basis of mobility region from pBR322&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="18" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10057-10231" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="19" name="CaMV poly(A) signal" type="polyA_signal" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="1612-1786" color="#a6acb3" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus polyadenylation signal&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="20" name="pVS1 oriV" type="rep_origin" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="13991-14185" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;origin of replication for the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="21" name="CaMV 35S promoter" directionality="1" type="promoter" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="3900-4245" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;strong constitutive promoter from cauliflower mosaic virus&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="22" name="BlpR" directionality="2" translationMW="20637.41" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="1793-2344" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="function"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;Streptomyces hygroscopicus bar&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to bialophos or phosphinothricin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;phosphinothricin acetyltransferase&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="MSPERRPADIRRATEADMPAVCTIVNHYIETSTVNFRTEPQEPQEWTDDLVRLRERYPWLVAEVDGEVAGIAYAGPWKARNAYDWTAESTVYVSPRHQRTGLGSTLYTHLLKSLEAQGFKSVVAVIGLPNDPSVRMHEALGYAPRGMLRAAGFKHGNWHDVGFWQLDFSLPVPPRPVLPVTEI*"/></Q></Feature><Feature recentID="23" name="ori" directionality="2" type="rep_origin" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="14855-204" color="#ffff00" type="standard"/><Q name="direction"><V text="LEFT"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="24" name="pVS1 StaA" directionality="1" translationMW="22058.22" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="11794-12423" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;stability protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="MKVIAVLNQKGGSGKTTIATHLARALQLAGADVLLVDSDPQGSARDWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIPVQPSPYDIWATADLVELVKQRIEVTDGRLQAAFVVSRAIKGTRIGGEVAEALAGYELPILESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI*"/></Q></Feature><Feature recentID="25" name="CaMV 35S promoter (enhanced)" directionality="2" type="promoter" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="2389-3065" color="#ffffff" type="standard"/><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;cauliflower mosaic virus 35S promoter with a duplicated enhancer region&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q></Feature><Feature recentID="26" name="KanR" directionality="2" translationMW="30974.14" type="CDS" swappedSegmentNumbering="1" allowSegmentOverlaps="0" readingFrame="-1" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="291-1085" color="#ccffcc" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="gene"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;i&gt;aphA-3&lt;/i&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;confers resistance to kanamycin&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="aminoglycoside phosphotransferase"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKMTDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYEDEQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDTPFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIAFCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF*"/></Q></Feature><Feature recentID="27" name="pVS1 RepA" directionality="1" translateFirstCodonAsMet="1" translationMW="39880.55" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" hitsStopCodon="1"><Segment range="12852-13925" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;replication protein from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Pseudomonas&lt;/i&gt; plasmid pVS1 (&lt;a href=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot; title=&quot;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10659714&quot;&gt;Heeb et al., 2000&lt;/a&gt;)&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="VSGRKPSGPVQIGAALGDDLVEKLKAAQAAQRQRIEAEARPGESWQAAADRIRKESRQPPAAGAPSIRKPPKGDEQPDFFVPMLYDVGTRDSRSIMDVAVFRLSKRDRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKPGRVFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGEALISRYKIVKSETGRPEYIEIELADWMYREITEGKNPDVLTVHPDYFLIDPGIGRFLYRLARRAAGKAEARWLFKTIYERSGSAGEFKKFCFTVRKLIGSNDLPEYDLKEEAGQAGPILVMRYRNLIEGEASAGS*"/></Q></Feature><Feature recentID="28" name="Cas9" directionality="1" translationMW="158441.55" type="CDS" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1" maxRunOn="9033" maxFusedRunOn="9033" detectionMode="exactProteinMatch"><Segment range="4894-8997" color="#993366" type="standard" translated="1"/><Q name="codon_start"><V int="1"/></Q><Q name="locus_tag"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="note"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;generates RNA-guided double strand breaks in DNA&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="product"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;Cas9 (Csn1) endonuclease from the&amp;nbsp;&lt;i&gt;Streptococcus pyogenes&lt;/i&gt;&amp;nbsp;Type II CRISPR/Cas system&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="protein_id"><V text="&lt;html&gt;&lt;body&gt;&lt;br&gt;&lt;/body&gt;&lt;/html&gt;"/></Q><Q name="transl_table"><V int="1"/></Q><Q name="translation"><V text="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"/></Q></Feature><Feature recentID="29" name="Feature 30" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="9925-9965" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature><Feature recentID="30" name="å�Œæº�è‡‚" type="misc_feature" allowSegmentOverlaps="0" consecutiveTranslationNumbering="1"><Segment range="10042-10092" color="#a6acb3" type="standard"/></Feature></Features>
   —<?xml version="1.0"?><Primers nextValidID="0"><HybridizationParams minContinuousMatchLen="10" allowMismatch="1" minMeltingTemperature="40"/></Primers>
  µ<Notes>
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<Type>Synthetic</Type>
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<Created UTC="7:59:46">2019.4.12</Created>
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<TransformedInto>unspecified</TransformedInto>
</Notes>
  Y      K         
?????                                                                                                       ÿ d      DO  d              E              ÿÿÿÿYô? P                                                                                                                                                              «<StrandColors><TopStrand><ColorRange range="0..15238" colors="black"/></TopStrand><BottomStrand><ColorRange range="0..15238" colors="black"/></BottomStrand></StrandColors>   3<?xml version="1.0"?><EnzymeVisibilities vals=""/>
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